福建细胞自噬

自噬体是自噬的标志性结构。自噬体属于亚细胞结构，直径一般为300～900nm，平均500nm，普通光镜下看不到。通过透射电子显微镜发现自噬体一直是观察自噬现象常用的方法，是自噬检测的“金标准”。透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，TEM）是使用较多的一类电镜。通过发射电子束从而穿过超薄的样品，同时与样本相互作用，既而形成图像。透射电镜具有分辨率高和放大倍数高的优点。其分辨率为0.1-0.2nm，放大倍数为几万到几十万倍。溶酶体中的酶随后将自噬体内容物降解。福建细胞自噬

GFP-LC3B 融合蛋白不仅能够利用其荧光标签进行检测，还可利用溶酶体对标签蛋白的切割通过 Western blot进行检测。GFP-LC3B 蛋白进入到自噬溶酶体内后 LC3B 部分对溶酶体中的蛋白水解酶较为敏感，较容易被降解。而融合蛋白中的 GFP 部分则对于溶酶体中的蛋白水解酶敏感性较低，不容易被降解。使用GFP 抗体进行 Western blot 检测可能会检测到 GFP-LC3B-I、GFP-LC3B-II 和游离 GFP 标签三个条带，若出现游离 GFP 标签条带则daibiao细胞自噬流活化。此外, 在检测同一细胞样品时还可以使用 LC3B 抗体检测内源性 LC3B-I 向 LC3B-II 转化。福建细胞自噬疫苗是预防肝病发生比较经济有效的方式，疫苗都与自噬关系密切。

目前，预防肝病发生或瘤进展的疫苗研究正在开展，其中已报道过自噬在其中产生影响的疫苗有自噬相关基因疫苗、DC疫苗、病毒疫苗和瘤抗原疫苗。如前所述，自噬在早期阶段主要起抑制肝病发生作用，但在后期发展、侵袭和转移过程中则主要起促进作用，有研究表明针对自噬配体蛋白p62的编码DNA的疫苗可以有效抑制肝病的发展和转移，但该实验只停留在狗、大鼠和小鼠模型，只在大鼠模型中进行了较小毒性剂量的测定。使用瘤细胞源自噬体刺激DC产生的疫苗研究表明，相比于只接种DC疫苗的肝病小鼠模型，接种瘤细胞源自噬体刺激获得的成熟DC疫苗的小鼠出现明显的特异性T淋巴细胞反应，抗瘤效应明显，瘤生长明显受到抑制。

线粒体自噬属于选择性自噬，其主要作用是降解细胞中损伤以及不需要的线粒体。当线粒体损伤之后，在正常的线粒体中持续被降解的PINK蛋白（PARL促进此反应）会处于稳定状态，再通过E3连接酶Parkin的作用来诱导线粒体自噬。Parkin会诱导线粒体膜蛋白的聚泛素化，由此导致与LC3结合的自噬受体蛋白的SQSTM1/p62,NBR1,andAmbra1聚集。此外，在特定的细胞类型中，同样存在LC3结合区域（LIR）的BNIP3和BNIP3L/NIX直接通过泛素依赖型反应机制也会聚集自噬反应的相关因子，进而促进自噬体的形成。高脂饮食则会导致机体的自噬受损，从而加速非酒精性脂肪肝向肝病方向发展。

蟾蜍灵（bufalin）是中药蟾酥中的主要成分之一，研究表明其可诱导多种肝ai细胞自噬。蟾蜍灵可激huo肝aiHepG2细胞自噬和凋亡，增强自噬Beclin-1（BECN-1）的表达，促进I型微管相关蛋白1轻链3（LC3-I）向II型微管相关蛋白1轻链3（LC3-II）的转化，抑制p62和mTOR信号通路表达，AMPK抑制剂可降低蟾蜍灵诱导自噬的作用，提示蟾蜍灵诱导的自噬作用可能是AMPK-mTOR依赖性的。蟾蜍灵可通过抑制Akt/mTOR通路，上调LC3-II、Beclin-1、Atg5、Atg7和Atg12蛋白的量，诱导SK-HEP-1细胞自噬性死亡。此外，蟾蜍灵还可诱导Huh7、Hep3B和HA22T细胞自噬，抑制细胞增殖，使细胞阻滞在G2/M期，其诱导自噬的机制可能与激huoJNK通路，上调中流坏死因子（TNF）、BECN-1、Atg8水平相关。细胞自噬过程的功能紊乱与多种疾病相关，包括病症、糖尿病和神经退行性疾病等。成都自噬荧光

在细胞遭受代谢应激、药物调整和放射性损伤时，自噬也是维护基因完整性的重要机制。福建细胞自噬

溶酶体的作用还包括对细胞内物质的消化，溶酶体能消化分解经胞吞作用摄入细胞内的各种物质和细胞内衰亡或损伤的各种细胞器等。吞噬性溶酶体内的各种大分子在水解酶的作用下，可以被分解为简单物质。例如，能将蛋白质分解为二肽或游离氨基酸；把核酸分解为核苷和磷酸；使碳水化合物分解为寡糖类或单糖；将中性脂肪分解为甘油和脂肪酸等。这些被分解而生成的可溶性小分子物质，能透过溶酶体体膜进入细胞质基质，重新参与细胞的物质代谢，一些未被完全消化的物质残留下来，形成残余小体。福建细胞自噬

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